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泥鳅的繁殖季节为5—8月，亲鱼应选择2龄以上，个体大、生猛而无伤残的。繁殖季节的雌鱼，腹部特别膨大突出，游动缓慢；雄鱼腹部硬平，不肥大，游动快捷。人工繁殖泥鳅每1尾雌性需2尾雄性的精液。成熟卵的鉴别：未成熟卵，若不强压腹部不能排出，经挤压排的卵为白色，不透明，没有粘着力。成熟的卵，轻压即可排出，黄色，有粘着力。每尾雌泥鳅可产卵2万个左右。卵用的器具和药液：容量为1—2毫升的注射器，注射针头为4—4——05号针头；直径6厘米左右的研钵，用于磨碎精巢的垂体；25毫升以上注射器及相应针头，用 取溶于林格氏液中的雄鳅精液，喷射至雌鳅排出的卵上，完成授精作用；瓷碗、羽毛、解剖用的刀、剪、镊子，用来摘取雄鱼的精巢及青蛙的脑下垂体；纱巾、毛巾、盆等。
林格氏液配方：在1升蒸馏水中，主氯化钠7.5克、氯化钾0.2克、氯化钙0.4克。如找不到氯化钾及氯化钙，亦可只用氯化钠，即人们食用的食盐，但应该用那种粗盐而不应用那种加了碘的卫生盐，配成0.75%的盐水。
诱导产卵的激素及剂量：用成年可食用的蛙类脑下垂体2个注射至1尾雌鱼腹内。如有条件，每条尾雌鱼亦可用鲤鱼或鲫鱼垂体一个，或绒毛膜促性腺激素180国际单位左右配在约0.2克林格氏液中，予以注射。
注射方法：时间一般在傍晚，这样可以控制雌鳅在翌晨产卵，从注射到顺利产卵的效应时间的长短与水温、亲鱼的成熟度及季节都有密切的关系，一般水温20度时为20小时，25度时为15小时。注射时用纱布包着鱼，在腹鳍前约1厘米的地方，避开正中线的部位，从后向前入针，要注意防止刺伤内脏。
精子液的制备：剖腹取出雄鱼精巢，在研钵中剪碎、研磨，立即加入林格氏液或075%的食盐水，1尾雄鱼精巢加入50毫升。制作时应避免日光直射，不能掺入淡水。
授精方法：把适量清水置于瓷碗中，左手用纱布抓住雌鱼，用右手由前向后轻压腹部使之排卵，排完卵的雌鱼可喂养至翌年再用。另一人持针筒吸取溶于林格氏液中的精液喷射在卵上，随即用羽毛搅拌，使精液与卵粒混匀，再将受精卵撒在清水中的鱼巢上。鱼巢一般可用水草、棕榈皮、水浮莲、塑料网纱等作成。
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